在液相色譜儀定量分析中，分離開是首要要求。基線分離是提供精確結果的有效保障。
含有5個組分或更少的樣品，使譜峰之間達到基線分離（R＞1.5)一般較為容易。分離度會隨色譜柱的使用時間逐步降低，也會由于分離條件的微小波動而在不同時間有所變化，因此在建立簡單混合物的分離方法時，最好使R≥2。這樣的分離度將有利于改善測試精度和方法的普適性；含10團種或10種以上組分的樣品，分離一般會很困難，目標分離度往往必須降低至R＞1.0—1.5。
盡管大多數HPLC設備能在更高的壓力下工作，使用新色譜柱的工作壓力不應超過170bar（2500psi , 17MPa），壓力上限最好在2000psi以下。
限制該壓力基于兩點原因：第一. 隨著色譜柱的使用，微粒雜質會逐步堵塞柱頭，使柱壓成倍升高；第二. 較低的壓力（< 170bar）適于泵、進樣閥、尤其是自動進樣裝置的穩定工作，密封墊的壽命更長，色譜柱堵塞的情況減少，系統的耐久性明顯提高。因此，最好以小于泵的最大允許壓力的50%作為目標壓力。
